SYBR GreenⅠ核酸染料（電泳用）

品名：SYBR GreenⅠ

品牌：金博益

濃度：10000×50ul  in DMSO

貨號：GBY-4

保存：-20℃

包裝：50ul

一.簡介

SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析，操作簡單：無須脫色或沖洗。至少可檢出20pg DNA，高于EB染色法10—25倍。SYBR Green I 與dsDNA 結(jié)合熒光信號會增強800—1000倍，用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號強，背景信號低?？蛇m用于多種電泳分析。

SYBR Green I 適合于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠，聚丙烯酰胺凝膠電泳，脈沖電場凝膠電泳，和毛細(xì)管電泳等。

SYBR Green I 與雙鏈DNA的親和力非常高，因此可以用做電泳前染色，對分子生物學(xué)中常用的酶（如：Taq 酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用。另外，SYBR Green I 與EB相比，誘變能力大大降低。

二．SYBR GreenⅠ預(yù)染色方法：

該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳

操作步驟

1. 工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的SYBR GreenⅠ稀釋100倍，即為SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2—8℃冷藏一個月以上。

2. 制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。

3. 樣品染色：向分析樣品中加入SYBR GreenⅠ工作液和載樣緩沖液，室溫放置3-5分鐘，使SYBR GreenⅠ與樣品中DNA充分結(jié)合。SYBR GreenⅠ工作液加入量為總上樣量的1/10。

4. DNA Marker染色：將5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混勻，室溫放置5分鐘，使SYBR GreenⅠ與DNA充分結(jié)合。

5. 上樣、電泳：按常規(guī)操作。

使用說明：

1. 該方法的靈敏度比SYBR GreenⅠ后染法低，靈敏度與EB染色并配合紫外觀測相當(dāng)。

2. SYBR GreenⅠ預(yù)染色會影響Marker及樣品的相對遷移率，如進(jìn)行酶切分析等需要準(zhǔn)確分析分子量大小的實驗，可以用SYBR GreenⅠ電泳后染色。

3. 該方法適用于PCR產(chǎn)物分析等多數(shù)分子生物學(xué)實驗，由于整個實驗過程不會對核酸樣品產(chǎn)生任何損害，該方法適用于凝膠中核酸的回收。

4. 在“SYBR GreenⅠ預(yù)染色方法”中，電泳時間不要超過2小時，否則SYBR GreenⅠ會從DNA上分離出來，會產(chǎn)生彌散狀條帶。

三．SYBR GreenⅠ后染方法：

操作步驟

1. 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。

2. 用PH 7.0-8.5 的緩沖液（如：TAE，TBE 或 TE），按照10000：1的比例稀釋SYBR GreenⅠ濃縮液，混勻，制成染色溶液。

3. 將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中，放入凝膠，用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10—30分鐘，染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色，玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理（避免染料吸附在玻璃表面上）。將配好的工作溶液輕輕地倒在膠板上，讓工作液均勻地覆蓋整個膠板，并染色30分鐘。

4. 用金銳達(dá)可見光透射儀觀測。藍(lán)光可透過玻璃，觀測聚丙烯酰胺凝膠時，可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入金銳達(dá)可見光透射儀內(nèi)觀測。

使用說明：

1. 染色溶液可以冷凍避光儲存，可以在一個星期內(nèi)重復(fù)使用4次。

2. SYBR GreenⅠ后染方法適用各種凝膠分析適用，檢測靈敏度高，至少可以達(dá)到20pg的DNA條帶。

四．SYBR Green I使用注意事項：

1. 在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中，SYBR Green I 可以全部從雙鏈核酸上去掉。

2. 如果想對用 SYBR Green I 染過的膠進(jìn)行 Southern blots，建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入 0.1%— 0.3% 的SDS。

3. 在紫外照射透視下，與雙鏈 DNA 接合的 SYBR Green I 呈現(xiàn)綠色熒光。如果膠中含有單鏈 DNA 則顏色為橘黃而不是綠色。

4. SYBR Green 對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。